Cell Meter Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒是通過測量Caspase 8的活性而用于細胞凋亡檢測的。Caspase 8 是一種Caspase蛋白，CASP8基因所編碼。在神經(jīng)元變性疾病中，例如亨廷頓綜合癥，caspase 8扮演著重要角色。Caspase 8已被證明具有底物選擇性，其肽基序為Ile-Glu-Thr-Asp (IETD)。該試劑盒使用(Ac-IETD)2-R110作為熒光指示器來檢測caspas-8的活性。通過caspas-8的切割R110肽產(chǎn)生強綠色熒光，其發(fā)射光在520 nm和530 nm之間，激發(fā)光為480 nm和500 nm之間。這種特性使得試劑盒能適合于FITC濾光器。本試劑盒提供所有必需組分和最佳操作流程。該實驗結(jié)果穩(wěn)定，快速且適應(yīng)高通量篩選。它不僅能夠定量凋亡細胞中caspas-8的活性還能篩選caspas-8的抑制劑。
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格 |
E0109 | Cell Meter Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒 綠色熒光 | 200Tests | 2544RMB |
工作溶液配制
將50μLCaspase8底物（組分A）加入10mL測定緩沖液（組分B）中并充分混合以制備Caspase 8工作溶液。 避光。 注意：Caspasae 8工作液不穩(wěn)定，請及時使用。
操作步驟
1.通過將10μL/孔的10X測試化合物（96孔板）或5μL/孔的5X測試化合物（384孔板）加入PBS或所需緩沖液中來處理細胞。對于空白孔（沒有細胞的培養(yǎng)基），加入相同量的化合物緩沖液。
2.將細胞板在5％CO 2,37℃培養(yǎng)箱中孵育所需的一段時間（對于用喜樹堿或星形孢菌素處理的Jurkat細胞，4-6小時）以誘導(dǎo)細胞凋亡。
3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 8工作溶液。
4.將板在室溫下孵育30分鐘至1小時，避光。注意：如果需要，在室溫下加入Caspase 8工作溶液10分鐘前，向選定的樣品中加入1μL的1 mM Ac-IETD-CHO caspase 8抑制劑，以確認對caspase 8樣活性的抑制作用。
5.以800rpm離心細胞板（特別是對于非貼壁細胞）2分鐘（制動關(guān)閉）。
6.用熒光酶標儀在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下監(jiān)測熒光增加。
客服1 